Устройство светового микроскопа и техника микроскопирования. Гистологическая техника. Методы и техника микроскопирования. Вопросы и задания для самоподготовки

Непременным условием получения отчетливого, резкого и ясного изображения микроскопируемого объекта является, как уже сказано, правильная установка освещения, а также правильный подбор окуляров и объективов.

Для установления правильного освещения: при работе с дневным светом открывают ирис-диафрагму, поднимают конденсор до уровня предметного столика и улавливают при малом увеличении плоской стороной зеркала лучшую освещенность поля зрения микроскопа; при искусственном освещении конденсор опускают настолько, чтобы изображение источника света находилось в плоскости препарата и было отчетливо видно в микроскоп.

При микроскопировании неокрашенных препаратов конденсор устанавливают, как выше описано, а ирис-диафрагму несколько суживают. Излишнюю яркость поля зрения можно ослабить также регулированием силы света лампочки осветителя, перемещая ручку реостата трансформатора и применяя светофильтр, либо опусканием конденсора. Следует помнить, что чем выше поднят конденсор, тем ярче будет освещено поле зрения микроскопа. Окрашенные препараты обычно рассматривают с иммерсионным объективом. Конденсор при этом должен быть поднят до предела, так как при микроскопировании с иммерсионной системой требуется особенно сильное освещение.

Для рассматривания препаратов при различных увеличениях пользуются разными сочетаниями окуляров и объективов. Выбор нужного увеличения определяется микроскопируемым объектом, целями исследования и разрешающей силой микроскопа. Под разрешающей силой микроскопа понимают то наименьшее расстояние между двумя точками препарата, изображение которых можно отчетливо различить при микроскопировании. Чем меньше это расстояние, тем больше разрешающая сила микроскопа. Предел разрешающей способности оптического микроскопа - 0,2 мкм - половина длины волны видимого спектра. Обусловлен он волновой природой света. Чем больше кривизна линз объектива (чем он сильнее), тем более мелкие объекты можно в этот объектив рассмотреть.

Объективы сухой системы имеют меньшую разрешающую способность, чем иммерсионные. Так, объектив с собственным увеличением 40Х дает возможность рассмотреть объекты размером не менее 0,85 мкм. Иммерсионный объектив 90X обычного биологического микроскопа позволяет увидеть объекты размером 0,45 мкм. У лучших современных оптических микроскопов, разрешающая способность иммерсионных объектов доведена до предела. Окуляры не открывают новых деталей в строении микробных клеток: они, увеличивая полученное от объектива изображение, дают возможность увидеть препарат тем крупнее, чем сильнее окуляр. Поэтому при микроскопировании дрожжевых клеток и плесневых грибов (как достаточно крупных объектов) можно пользоваться объективом 40 X. Для изучения бактерий следует применять иммерсионный объектив 90Х. Окуляры в обоих случаях можно использовать любые.

Процесс микроскопирования начинают с того, что на предметный столик микроскопа помещают приготовленный препарат и зажимают его клеммами. Наблюдая сбоку (глаза должны находиться на уровне предметного столика), опускают макрометрическим винтом (кремальерой) тубус микроскопа почти до соприкосновения объектива с покровным стеклом, а иммерсионный объектив погружают в каплю кедрового масла, нанесенную на высушенный окрашенный препарат.

Нельзя опускать объектив чрезмерно низко, а тем более давить им на стекло, так как при этом можно не только раздавить покровное (и даже предметное!) стекло, но и повредить фронтальную линзу объектива. В последнем случае объектив выбывает из строя. Особенно осторожно нужно опускать тубус микроскопа при работе с иммерсионным объективом, так как свободное рабочее пространство этого объектива составляет всего 0,15 мм.

После того как тубус будет опущен, смотря в окуляр, начинают медленно вращать макрометрический винт «на себя», до появления в поле зрения микроскопа контуров объекта (грубая наводка). Наиболее четкого и резкого изображения (фокусировки микроскопа) добиваются вращением микрометрического винта. Однако вращать микрометрический винт более чем на один-два полных оборота в ту или другую сторону не рекомендуется.

Если при вращении кремальеры изображение оказалось «пропущенным», нельзя, глядя в окуляр, быстро обратным вращением опускать тубус микроскопа вниз, так как можно раздавить предметное стекло и испортить объектив. В этом случае опять, смотря сбоку, нужно установить объектив в исходное положение и операцию фокусировки повторить сначала.

После работы иммерсионное масло с объектива удаляют чистой тряпочкой, фронтальную линзу объектива протирают маленьким ватным тампоном, слегка смоченным спиртом (пользуются и авиационным бензином), и вновь протирают сухой чистой тряпочкой. Удалять кедровое масло с объектива нужно легко, без давления. Хранить микроскоп следует в футляре либо закрывать его чехлом или стеклянным колпаком для предохранения от пыли.

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Размещено на http://www.allbest.ru/

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 1.

Микробиологическая лаборатория. Микроскоп и техника микроскопирования

Цель: Ознакомление студентов с назначением, устройством, оборудованием и режимом работы микробиологической лаборатории; освоение техники микроскопии микробиологических препаратов.

Контрольные вопросы:

1) Назначение микробиологической лаборатории, ее устройство и оснащение.

Устройство микробиологической лаборатории

Микробиологические исследования осуществляются в специальных помещениях, называемых микробиологической лабораторией. В состав микробиологической лаборатории входят несколько помещений:

1 - лабораторная комната для исследований;

2 - комната для приготовления питательных сред;

3 - комната для мойки посуды (моечная);

4 - комната для стерилизации посуды, питательных сред

(стерилизационная);

5 - бокс - изолированная комната для проведения работ, требующих повышенной степени стерильности. Для этого перед работой воздух и другие предметы, находящиеся в нем, обеззараживаются.

Оборудование микробиологической лаборатории

К оборудованию микробиологической лаборатории относятся приборы оптические (микроскопы, лупы), приборы термические (термостаты, автоклавы, аппараты Коха, сушильные шкафы, холодильники, микробиологические (бактериологические иглы, петли, шпатели) и хирургические инструменты (скальпели, пинцеты, держатели, ножницы), а также пробирки, чашки Петри, покровные и предметные стекла, стеклянные трубочки, капельницы с красителями. В лаборатории необходимо наличие питательных сред (сухой питательный агар, среда Кесслер, среда Эндо), агар-агара, желатина, аналиновых красителей (фуксин, генцианвиолет, метиленовый синий, метиленовый голубой), различные кислоты, щелочи, сода.

Рисунок 1 - Микробиологическая посуда: а-- чашка Петри; б-- стекло предметное; в-- стекло покровное; г-- игла микробиологическая; д-- петля микробиологическая; е-- шпатель Дригальского.

2) Как должно быть оборудовано рабочее место микробиолога?

Каждый студент должен иметь в лаборатории постоянное место работы. Рабочее место должно быть снабжено микроскопом, штативом для пробирок, бактериологическими иглами и петлями, шпателем Дригальского, пипетками, набором покровных и предметных стекол, промывалкой с водой, спиртовкой, спичками, чашкой с мостиком, набором красителей, фильтровальной бумагой, песочными часами и сосудом с дезинфицирующим раствором.

3) Какие существуют методы микробиологических исследований и какие из них применяются для микробиологического анализа пищевых продуктов?

Для изучения микроорганизмов используется несколько специфических методов. Основными видами микробиологических исследований являются:

Бактериоскопическое (микроскопическое) - изучение с помощью микроскопа формы и строения микроорганизмов;

Бактериологическое - изучение культур микроорганизмов путем культивирования, т.е. выращивания на искусственных питательных средах;

Экспериментальное - определение микроорганизмов и их ядов путем заражений ими подопытных животных (мышей, белых крыс, морских свинок). Чаще всего используется для идентификации возбудителя пищевых отравлений;

Серологическое - определение микроорганизмов при помощи сыворотки крови, содержащей антитела. Этот метод широко используется в медицинской микробиологии.

При микробиологическом анализе пищевых продуктов применяются первые два вида исследований. Методом бактериологического исследования определяют культуральные признаки (размер, форму, структуру, цвет, блеск, профиль отдельной колонии) и биохимические особенности микроорганизмов (способность сбраживать вещество, входящее в состав различных питательных сред). При бактериоскопическом исследовании определяют морфологические особенности (размер, форму и т.д.) отдельных микроорганизмов и их способность окрашиваться различными красителями (тинкториальные свойства). Поскольку в природе существует много микробов-двойников, похожих по внешнему виду друг на друга, поэтому для определения вида микроорганизмов одной бактериоскопии обычно недостаточно, необходимо применение бактериологического метода исследования.

4) Каковы правила работы в лаборатории микробиологии?

Работа в микробиологических лабораториях должна осуществляться в условиях стерильности, что является основным правилом техники безопасности. Выполнение микробиологических работ в условиях стерильности должно обеспечить предупреждение как загрязнения внешней среды и работающего персонала микробами из исследуемого материала, так и самих выделяемых чистых культур посторонними микроорганизмами из окружающей среды.

При работе в микробиологической лаборатории следует соблюдать следующие правила:

а) находиться в помещении лаборатории и работать в ней обязательно в халате;

б) пользоваться постоянным рабочим местом;

в) следить за порядком на рабочем месте, не держать на нем никаких посторонних предметов;

г) пинцеты, шпатели, микробиологические петли и иглы, пипетки после работы с микроорганизмами прожигать в пламени спиртовки или погружать в сосуд с дезинфицирующим раствором (хлорамин, дизол, карболовая кислота);

д) все использованные материалы с микроорганизмами - отработанные препараты из живых культур, временные препараты и др. - вначале обезвредить стерилизацией или дезинфекцией и только после этого мыть;

е) по окончании занятий привести в порядок рабочее место, снять халаты, и после этого обязательно вымыть руки.

В лаборатории запрещается:

а) находиться в головных уборах и верхней одежде;

б) работать без халатов;

в) принимать пищу, пить воду, курить;

г) класть на столы посторонние предметы;

д) касаться немытыми руками лица;

е) избегать лишнего хождения, резких движений, сквозняков, способствующих загрязнению исследуемого материала посторонней микрофлорой.

5) Опишите устройство биологического иммерсионного микроскопа.

Величина большинства микроорганизмов измеряется микронами, или микрометрами (1 мкм = 1 10 -6 и = 1 10 -3 мм), поэтому рассмотреть и изучить их можно только с помощью специальных оптических приборов - микроскопов.

Принцип работы биологического иммерсионного микроскопа заключается в получении действительного обратного изображения предмета в проходящем или искусственном свете.

В микроскопе различают три части - механическую, оптическую и осветительную (см. рис.1).

Механическая часть, или штатив, состоит из опорной части - основания микроскопа 1 и тубусодержателя 2, на котором укреплены предметный столик 3, кронштейн конденсора 4 и зеркало (или осветитель) 5, а в верхней части - головка 6, наклонный тубус 7 и револьвер 8 с объективами.

Предметный столик служит для закрепления на нем рассматриваемого предмета (препарата), он может перемещаться в горизонтальной плоскости с помощью винтов 9.

Рисунок 2-Микроскоп «Биолам Р 1У4.2»

микробиологическая лаборатория микроскоп препарат

Фокусировка препарата достигается перемещением тубуса с помощью механизма, который приводится в движение двумя винтами - макрометрическим 10 (грубая фокусировка) и микрометрическим 11 (тонкая фокусировка). Одним оборотом микрометрического винта тубус передвигается на 0,1 мм. При вращении винтов по часовой стрелке тубус микроскопа опускается, при вращении против часовой стрелки - поднимается.

Внимание! Микрометрический винт - одна из наиболее хрупких частей микроскопа и обращаться с ним нужно наиболее осторожно!

Оптическая часть микроскопа представлена объективами 12 и окуляром 13.

Объектив - это основная часть микроскопа. Он состоит из системы линз, заключенных в металлическую оправу. Увеличение объектива зависит от фокусного расстояния передней (фронтальной) линзы - единственной линзы, дающей увеличение. Чем больше кривизна фронтальной линзы, тем короче фокусное расстояние и тем больше увеличение объектива. Расположенные над ней корреляционные линзы предназначены для получения более четкого изображения (устранения дефектов изображения - сферической и хроматической аберраций). Увеличение, которое дают объективы, указано цифрами на их оправе.

В зависимости от степени даваемого увеличения объективы делятся на объективы малого, среднего и большого увеличений.

6) Как определяется общее увеличение микроскопа?

Общее увеличение микроскопа определяется произведением увеличения объектива на увеличение окуляра. Например, если увеличение объектива 90 х, а окуляра 15 х, то общее увеличение равно 1350 х.

Осветительное устройство расположено под предметным столиком. Его назначение - освещение поля зрения препарата. В осветительном устройстве различают зеркало, либо осветитель, и конденсор с ирисовой диафрагмой 14.

Конденсор представляет собой систему сильных линз и служит для усиления яркости освещения рассматриваемого объекта. Он собирает отраженные от зеркала лучи света в пучок и концентрирует их в плоскости препарата. Передвигается конденсор в вертикальном направлении при помощи винта 15. При опускании конденсора поле зрения микроскопа затемняется, при поднятии - освещается.

Ирисовая диафрагма расположена под конденсором. Она состоит из тонких металлических сегментов, которые при помощи рычажка можно сдвигать или раздвигать, регулируя этим поступление света в конденсор.

7) Что такое сухие и иммерсионные объективы?

Объективы малого увеличения (3 х, 5 х, 8 х, 9 х, 10 х) применяют главным образом для предварительного осмотра препарата. Объективы среднего увеличения (20 х, 40 х, 60 х) - для изучения крупных клеток микроорганизмов (например, грибов). Эти объективы называют сухими, поскольку при микроскопии между фронтальной линзой и препаратом находится воздух. Вследствие различия показателей преломления воздуха (n = 1) и стекла (n = 1,52) часть лучей, освещающих препарат, рассеивается и не попадает в объектив.

Объективы больших увеличений (85 х, 90 х) называются иммерсионными. Их применяют для изучения мелких форм микроорганизмов (например, бактерий). При работе с ними препарат должен быть максимально освещен. Светорассеивание, неизбежное при работе с объективами, в данном случае устраняется благодаря использованию иммерсионных жидкостей, показатель преломления которых близок к показателю преломления стекла. Чаще всего используют кедровое масло, у которого n=1,515. Каплю жидкости наносят на препарат и погружают в нее объектив. Короткое фокусное расстояние объективов большого увеличения ((1,9 - 2,1)мм) позволяет исследовать объект, не поднимая объектив из капли, вследствие чего создается однородная среда между линзой и препаратом.

Окуляр состоит из двух линз, заключенных в общую металлическую оправу. Верхняя линза называется глазной, нижняя - собирательной. Окуляр лишь увеличивает изображение, даваемое объективом. Микроскопы системы «Биолам» снабжены окулярами, дающими увеличение 7 х, 10 х и 15 х (цифры указаны на оправе).

8) Что означает понятие «разрешающая способность» микроскопа? Какова разрешающая способность микроскопа серии «Биолам»?

Основной технической характеристикой микроскопа является разрешающая способность - т.е. минимальное расстояние между двумя точками рассматриваемого предмета, на котором они не сливаются в одну и предмет виден отчетливо. В лабораторной практике наиболее широко используются биологические иммерсионные микроскопы серии «Биолам», позволяющие получить увеличение объекта до 1800 раз. Их предельная разрешающая способность равна 0,21 мкм, следовательно, пользуясь этими микроскопами, можно рассматривать объекты величиной не менее 0,21 мкм.

9) Каковы правила микроскопии препарата?

Микроскопию препаратов всегда начинают с установки света. При работе в дневное время пользуются естественным освещением, однако чаще прибегают к источникам искусственного света, которые обеспечивают регулируемое освещение (осветители ОИ-19, ОИ-35).

При установке света конденсор должен быть поднят до упора, ирисовая диафрагма открыта. Настройка освещения производится с объективом малого увеличения (8 х). Его опускают на расстояние около 0,5 см от предметного столика, затем, глядя в окуляр и вращая зеркало, добиваются равномерного яркого освещения всего поля зрения.

Приготовленный препарат помещают на предметный столик, укрепляют клеммами. Микроскопию начинают с обзорного просмотра препарата при малом увеличении. При этом, наблюдая сбоку, опускают объектив при помощи макрометрического винта на расстояние около 1 см от предметного столика. Глядя в окуляр, и медленно вращая макроскопический винт, поднимают тубус до появления отчетливых контуров препарата. Для точной фокусировки пользуются микрометрическим винтом, который вращают не более чем на четверть оборота. На этом этапе при исследовании бактерий можно, медленно передвигая препарат на предметном столике, найти наиболее подходящее для микроскопии поле зрения: участок препарата, на котором микроорганизмы находятся в достаточном для просмотра количества, располагаются в один слой, равномерно.

При микроскопии со средним увеличением заменяют объектив малого увеличения на объективы 40 х или 60 х. О центрированном положении объектива свидетельствует щелчок фиксатора внутри револьвера. Глядя в окуляр, еще более медленно поднимают тубус до появления изображения и уточняют фокус микрометрическим винтом.

Микроскопия при большом увеличении (объектив 90 х) проводится с иммерсионным маслом, каплю которого наносят на препарат. Затем заменяют сухой объектив на иммерсионный, под контролем глаза (вид сбоку) погружая его в масло почти до соприкосновения фронтальной линзы с предметным стеклом. Глядя в окуляр, макрометрическим винтом слегка поднимают тубус до появления изображения препарата, а затем с помощью микроскопического винта добиваются его фокусировки.

По окончании работы поднимают тубус, снимают с предметного столика препарат, опускают конденсор и тщательно удаляют сухой хлопчатобумажной салфеткой масло с фронтальной линзы иммерсионного объектива. Остатки иммерсионного масла могут повредить линзу и ухудшить изображение при микроскопии.

При микроскопии возможны следующие ошибки:

Неполное освещение поля зрения вследствие неправильного положения зеркала или неправильного положения объектива (передвинут на револьвере микроскопа не до щелчка);

Тусклое освещение поля зрения при неправильном положении зеркала, при опущенном конденсоре или закрытой диафрагме, а также при недостаточном количестве иммерсионного масла на препарате;

Отсутствие резкости в изображении предмета - препарат не в фокусе.

Вывод: Ознакомились с назначением, устройством, оборудованием и режимом работы микробиологической лаборатории; освоили технику микроскопии микробиологических препаратов.

Размещено на Allbest.ru

Подобные документы

    Оборудование в микробиологической лаборатории. Оборудование рабочего стола. Мытье лабораторной посуды. Уборка помещений лаборатории. Техника взятия и доставки материала в микробиологическую лабораторию. Техника безопасности при работе в лабораториях.

    курсовая работа , добавлен 01.10.2015

    Разновидности микробиологических лабораторий. Методы микробиологического исследования: микроскопический, бактериологический, биологический, серологический. Отбор образцов для микробиологического анализа. План бактериологической лаборатории, виды приборов.

    презентация , добавлен 21.09.2016

    Понятие увеличительных приборов (лупа, микроскоп), их назначение и устройство. Основные функциональные и конструктивно-технологические части современного микроскопа, используемого на уроках биологии. Проведение лабораторных работ на уроках биологии.

    курсовая работа , добавлен 18.02.2011

    Методы изучения морфологии микроорганизмов. Правила работы в микробиологической лаборатории. Микроскопия в светлом поле. Установка света по Келеру. Изображения фиксированных препаратов, полученные в результате исследования метода изучения морфологии.

    лабораторная работа , добавлен 14.05.2009

    Состав и направления деятельности кафедры микробиологии и иммунологии. Принципы работы в микробиологической лаборатории. Подготовка посуды и инструментов. Техника отбора проб, посева и приготовления питательных сред. Методы идентификации микроорганизмов.

    отчет по практике , добавлен 19.10.2015

    Виды тлей, вредящих в защищенном грунте, применение энтомофаг против них в теплицах. Микробиологическая борьба с вредителями защищенного грунта. Методика разведения виковой тли. Оценка влияния микробиологических препаратов на пятнистую оранжерейную тлю.

    дипломная работа , добавлен 05.02.2011

    Биография Антони ван Левенгука, его роль в развитии микробиологии. Совершенствование конструкции микроскопа, его использование в микробиологических исследованиях. Изучение Левенгуком причинных связей и способов появления и размножения микроорганизмов.

    реферат , добавлен 28.10.2015

    Организация лабораторной микробиологической службы. Принципы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний. Методы выделения и идентификации бактерий, вирусов, грибковых инфекций, простейших.

    реферат , добавлен 05.05.2006

    Техника приготовления гистологических препаратов для световой микроскопии, основные этапы данного процесса и требования к условиям его реализации. Методы исследования в гистологии и цитологии. Примерная схема окраски препаратов гематоксилин – эозином.

    контрольная работа , добавлен 08.10.2013

    Изучение особенностей микроорганизмов. Микроэкологический риск при использовании высоких технологий. Характеристика технологии приготовления препаратов и опытов. Правила микроскопирования. Влияние гигиенических навыков на распространение микроорганизмов.

РАЗДЕЛ: ЦИТОЛОГИЯ

ТЕМА : «УСТРОЙСТВО СВЕТОВОГО МИКРОСКОПА И ТЕХНИКА МИКРОСКОПИРОВАНИЯ».

Форма организации учебного процесса: практическое занятие.

Место проведения: учебная комната.

Цель занятия: на основании знания устройства светового микроскопа освоить технику микроскопирования и приготовления временных препаратов.

Значимость изучаемой темы

Световая микроскопия – один из объективных методов биологических, медико-биологических и медицинских дисциплинах. Умение правильно пользоваться микроскопом, грамотно оценивать, интерпретировать, документировать (зарисовывать) наблюдаемую микроскопическую картину являются обязательным условием успешного освоения материала на практических занятиях по биологии, гистологии, патологической анатомии, микробиологии.

        1. В результате работы на практическом занятии студент должен

знать:

    устройство светового микроскопа;

    правила работы со световым микроскопом.

уметь:

    работать со световым микроскопом на малом и большом увеличениях;

    готовить временный препарат;

    оформлять зарисовки микроскопических препаратов;

    оформлять протокол занятия.

Оснащение занятия:

Компьютер;

Проектор;

Презентация PowerPointпо теме;

Световой микроскоп;

Бинокуляр;

Микропрепараты (любые);

Предметные стекла;

Покровные стекла;

Чашки Петри;

Скальпель;

Марлевые салфетки;

Фильтровальная бумага;

Спиртовый раствор йода;

Луковица.

Практическая часть занятия

    1. Работа № 1. Устройство светового микроскопа.

Задание 1:

    внимательно прочитайте содержание работы № 1 и изучите устройство светового микроскопа.

Рассмотрите основные части микроскопа: механическую, оптическую, осветительную.

К механической части относятся: штатив, предметный столик, тубус, револьвер, макро- и микрометрические винты.

Штатив состоит из массивного подковообразного основания, придающего микроскопу необходимую устойчивость. От середины основания вверх отходит тубусодержатель, изогнутый почти под прямым углом, к нему прикреплен тубус, расположенный наклонно.

На штативе укреплен предметный столик с круглым отверстием в середине. На столик помещают рассматриваемый объект (отсюда название «предметный»). На столике имеются два зажима, или клеммы, неподвижно фиксирующие препарат. По бокам столика расположены два винта – препаратовыделители, при вращении которых столик передвигаются вместе с объективом в горизонтальной плоскости. Через отверстие в середине столика проходит пучок света, позволяющий рассматривать объект в проходящем свете.

На боковых сторонах штатива, ниже предметного столика, найдите два винта, служащие для передвижения тубуса. Макрометрический винт, или кремальера, имеет большой диск и при вращении поднимает или опускает тубус для ориентировочной наводки на фокус. Микрометрический винт, имеющий наружный диск меньшего диаметра, при вращении перемещает тубус незначительно и служит для точной наводки на фокус. Вращать микрометрический винт можно только на полоборота в обе стороны.

Оптическая часть микроскопа представлена окулярами и объективами.

Окуляр (от лат. oculus- глаз) находится в верхней части тубуса и обращен к глазу. Окуляр представляет собой систему линз, заключенных в металлическую гильзу цилиндрической формы. По цифре на верхней поверхности окуляра можно судить о кратности его увеличения (Х 7, Х 10, Х 15). Окуляр можно вынимать из тубуса и заменять по мере надобности другим.

На противоположной стороне найдите вращающуюся пластинку, или револьвер (от лат. revolvo- вращаю), в которой имеется 3 гнезда для объективов. Как и окуляр, объектив представляет собой систему линз, заключенных в общую металлическую оправу. Объектив ввинчивается в гнездо револьвера. Объективы также имеют различную кратность увеличения, которая обозначается цифрой на его боковой поверхности. Различают: объектив малого увеличения (Х 8), объектив большого увеличения (Х 40) и имерсионный объектив, используемый для изучения наиболее мелких объектов (Х 90).

Общее увеличение микроскопа равно увеличению окуляра, умноженному на увеличение объектива. Таким образом, световой микроскоп имеет максимальную кратность увеличения 15 Х 90 или может максимально увеличивать в 1350 раз.

Осветительная часть микроскопа состоит из зеркала, конденсора и диафрагмы.

Зеркало укреплено на штативе ниже предметного столика и благодаря подвижному креплению его можно вращать в любом направлении. Это дает возможность использовать источники света, расположенные в различных направлениях по отношению к микроскопу, и направлять пучок света на объект через отверстие в предметном столике. Зеркало имеет две поверхности: вогнутую и плоскую. Вогнутая поверхность сильнее концентрирует световые лучи и поэтому используется при более слабом, искусственном освещении.

Конденсор находится между зеркалом и предметным столиком, он состоит двух-трех линз, заключенных в общую оправу. Пучок света, отбрасываемый зеркалом, проходит через систему линз конденсора. Меняя положение конденсора (выше, ниже), можно изменить интенсивность освещенности объекта. Для перемещения конденсора служит винт, расположенный кпереди от макро и микровинтов. При опускании конденсора освещенность уменьшается, при поднимании – увеличивается. Диафрагма, вмонтированная в нижнюю часть конденсора, также служит для регуляции освещения. Эта диафрагма состоит из ряда пластинок, расположенных по кругу и частично перекрывающих друг друга таким образом, что в центре остается отверстие для прохождения светового пучка. С помощью специальной ручки, расположенной на конденсоре с правой стороны, можно менять положение пластинок диафрагмы относительно друг друга и таким образом уменьшать или увеличивать отверстие и, следовательно, регулировать освещенность.

Задание 2:

Задание 3:

    в рабочей тетради письменно дайте ответы на вопросы для самоконтроля.

Вопросы для самоконтроля:

    Какие детали светового микроскопа относятся к механической части?

    Какие детали светового микроскопа относятся к оптической части?

    Какие детали светового микроскопа относятся к осветительной части?

    Укажите, какой кратности увеличения могут быть объективы?

    Укажите, какой кратности увеличения могут быть окуляры?

    Как называется объектив, кратностью увеличения х90?

    Какую кратность увеличения имеет объектив «большого» увеличения?

    Как можно найти общую кратность увеличения микроскопа?

    Какую роль выполняет конденсор?

    Для чего нужна диафрагма?

    В каких случаях используется вогнутая поверхность зеркала?

Для обнаружения и исследования микроорганизмов применяют световые микроскопы разных моделей («МБИ-1», «Биолам», «Бимам», «Микмед»). Для изучения более мелких объектов (вирусов) используют электронные микроскопы.

Все микроскопы устроены одинаково и состоят из механической части и оптической системы. Механическая часть состоит из основания штатива (1), предметного столика (2), тубусодержателя (3), револьвера объектива (4), макровинта (5) - для перемещения тубуса, микровинта (6) – для тонкой фокусировки. Оптическая часть микроскопа состоит из объективов (7), окуляров (8) и осветительного устройства (9). Объективы представляют собой систему линз, одна из которых производит увеличение, а все остальные корригируют изображение. Окуляры состоят из двух линз (собирающей и глазной). Они увеличивают изображение, получаемое с помощью объектива. Осветительное устройство (зеркало, ирис-диафрагма и конденсор).

1. Препарат помещают на предметный столик микроскопа и закрепляют его боковыми зажимами.

2. Вращая револьвер, устанавливают объектив малого увеличения 8х.

3. Находят правильное освещение препарата. Для этого, пользуясь плоским зеркалом, или светильником направляют свет от источника в конденсор микроскопа, стремясь получить равномерное освещение поля зрения. Лучшее освещение подбирают поднятием или опусканием конденсора и при помощи диафрагмы.

4. Находят изображение при малом увеличении (объектив 8х), фокусируя макрометрическим винтом.

5. Без поднятия тубуса, вращая револьвер, заменяют объектив малого увеличения на объективы большого увеличения (40х, 90х).

6. При использовании иммерсионного объектива (90х) открывают диафрагму конденсора, чтобы увеличить свет. На препарат наносят каплю иммерсионного (кедрового) масла. Затем, глядя на препарат сбоку (для контроля, чтобы не раздавить стекло и не поцарапать фронтальную линзу объектива), очень осторожно погружают объектив 90х в масло почти до соприкосновения с поверхностью стекла, работая макрометрическим винтом. Далее очень медленно поднимают тубус при помощи макровинта до появления в поле зрения изучаемого объекта. Наконец, резкость изображения устанвливают микрометрическим винтом.

При микроскопии в темном поле лучи, освещающие объект не попадают в объектив микроскопа, поле зрения остается темным, а объект на его фоне кажется светящимся. Эффект темного поля создается при помощи специального конденсора.

С помощью фазово-контрастной микроскопии могут быть исследованы без предварительной обработки бесцветные, прозрачные объекты. Для работы по методу фазового контраста, нужно кроме обычного биологического микроскопа, иметь еще специальное устройство. Для этого конденсор и объектив заменяют фазовыми. Фазовый конденсор поворотом револьверного диска устанавливают на 0. Это положение соответствует светопольному конденсору.

Современный микроскоп – это точный оптический прибор, требующий строгого соблюдения ряда правил при работе с ним. Хранить микроскоп нужно закрытым от пыли (под чехлом или под специальным стеклянным колпаком). Время от времени следует проверять чистоту и состояние оптики и протирать ее только снаружи с помощью волосяной кисточки или мягкой ткани, смоченной спиртом. Раз в год микроскоп должен просмотреть и при необходимости отремонтировать мастер-оптик.

1. Препарат помещают на предметный столик микроскопа и закрепляют его боковыми зажимами.

2. Вращая револьвер, устанавливают объектив малого увеличения 8х.

3. Находят правильное освещение препарата. Для этого, пользуясь плоским зеркалом, или светильником направляют свет от источника в конденсор микроскопа, стремясь получить равномерное освещение поля зрения. Лучшее освещение подбирают поднятием или опусканием конденсора и при помощи диафрагмы.

4. Находят изображение при малом увеличении (объектив 8х), фокусируя макрометрическим винтом.

5. Без поднятия тубуса, вращая револьвер, заменяют объектив малого увеличения (8х) на объективы большего увеличения (40х,90х).

а) При работе со средним увеличением (объектив 40х) диафрагму конденсора слегка приоткрывают, чтобы усилить освещение. Фокусируют при помощи микрометрического винта.

б) При использовании иммерсионного объектива (90х) открывают диафрагму конденсора, чтобы увеличить свет. На препарат наносят каплю иммерсионного (кедрового) масла. Затем, глядя на препарат сбоку (для контроля, чтобы не раздавить стекло и не поцарапать фронтальную линзу объектива), очень осторожно погружают объектив 90х в масло почти до соприкосновения с поверхность стекла, работая макрометрическим винтом. Далее очень медленно поднимают тубус при помощи макровинта до появления в поле зрения изучаемого объекта. Наконец, резкость изображения устанавливают микрометрическим винтом.

Изучаемые объекты, как правило, принято зарисовывать. Для этого препарат помещается в поле зрения микроскопа в положении наиболее удобном для зарисовки, что достигается передвижением предметного столика. Зарисовка производится по возможности точно в отношении размера, формы, расположения клеток бактерий, дрожжей, органов спороношения мицелиальных грибов и т.д.

Правила обращения с микроскопом

1. Микроскоп следует оберегать от пыли, т.е. хранить в футляре или под колпаком.

2. Нельзя оставлять микроскоп на солнце или около зажженой горелки, т.к. может расплавиться канадский бальзам, которым склеены линзы в объективах.

3. Окончив просмотр препарата, сначала поднимают тубус, а затем снимают со столика препарат.

4. По окончании работы с микроскопом, подняв тубус и поставив объектив в удобное положение, осторожно, протирают его фронтальную линзу при помощи чистой мягкой хлопчатобумажной ткани или специальной фланели.

5. Особое внимание обращают на иммерсионный объектив, масло с поверхности которого удаляют указанной тканью, смоченной очищенным бензином или спиртом.

Нельзя допускать присыхания масла на объективе .



6. Особенно бережно необходимо относиться:

а) к микрометрическому винту - не делать полных оборотов.

б) к иммерсионному объективу, т. к. из-за короткого фокусного расстояния его фронтальной линзы, легко можно раздавить предметное стекло с препаратом, что может привести к появлению царапин на линзе.

Бактерии объединяют обширную группу в основном одноклеточных микроорганизмов, различающихся по форме, размерам, взаимному расположению клеток, наличию или отсутствию спор, жгутиков, капсул и т. д. (Рис. 3,4).

Для определения группы или вида бактерий, прежде всего, изучают их морфологические признаки: формы и сочетания клеток, их размеры, подвижность, способность к спорообразованию, отношение к окраске по Граму, наличие капсул и клеточных включений. Изучение морфологических признаков бактерий осуществляется обычно с помощью оптического микроскопа.

Рис. 3. Основные формы бактерий:

1-стафилококки; 2-3-диплококки; 4-стептококки; 5-тетракокки; 6-сарацины; 7-9-различные виды палочек.


Рис. 4. капсулы, споры и жгутики бактерий:

а-капсулы; б-форма и расположение спор; в-монотрихи; г-лофотрихи;

д-перитрихи.

Для изучения бактерий под микроскопом готовят препараты на предметном стекле. Предметные стекла – это пластинки из тонкого стекла (76х26 мм) с хорошо отшлифованными краями. Сверху препарат закрывается покровным стеклом. Их размеры – 18x18, 20x20 мм и др. Все стекла (предметные и покровные) должны быть совершенно чистыми и обезжиренными. Стекла считаются чистыми в том случае, если вода легко расплывается на поверхности стекла, не образуя капель шаровидной формы.

Очистка новых стекол производится в течение 10 минут в 1% растворе соды с последующей промывкой дистиллированной водой, затем слабой соляной кислотой и вновь дистиллированной водой. Стекла бывшие в употреблении, выдерживаются и концентрированной серной кислоте, промываются водой, кипятятся в 2% растворе соды в течение 10 минут, после чего тщательно промываются дистиллированной водой.

Обезжиренные стекла хранят в закрытой чистой коробке и при употреблении следует их брать так, чтобы не прикасаться к их поверхности.

Микроскопирование бактерий можно проводить, рассматривая их как в живом состоянии, так и в мертвом, в специально приготовленных окрашенных препаратах. Последние весьма широко используются в практике, т.к. вследствие слишком малых размеров клеток бактерий, в живом состоянии не удается рассмотреть некоторые детали их строения, (оболочка, включения, наличие спор), в то время как они более четко выявляются при окрашивании мертвых клеток специальными красками.